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基于氣血理論的黃芪納米微乳膠原促進(jìn)血管新生機理的系列實驗研究
發(fā)布日期:2012年12月25日

 現(xiàn)代生物學(xué)的研究進(jìn)展揭示了血管新生是創(chuàng)傷修復(fù)中的一個復(fù)雜動態(tài)過程。以修飾膠原作為支架,植入促血管生長因子(如VEGF、PDGF等)制備生物材料參與上述過程是國際生物學(xué)界的重大命題。但是生長因子的“雙刃劍效應(yīng)”可能導(dǎo)致的癌變結(jié)局使得其臨床價值有待于進(jìn)一步的評估。而中藥資源在我國極為豐富,綠色自然;大宗文獻(xiàn)證實,有著中醫(yī)“補藥之長”美譽的黃芪具有顯著的促愈功效,如何從中醫(yī)學(xué)的原創(chuàng)性理論研究這一命題是本項目創(chuàng)意的出發(fā)點。          
    這一創(chuàng)意是緣于對當(dāng)歸補血湯方意——補氣以生血的思考。該方首載《內(nèi)外傷辨》,其重用黃芪,5倍于當(dāng)歸,能夠“大補脾肺之氣,以裕生血之源”,用治于血虛發(fā)熱證,體現(xiàn)出中醫(yī)所指認(rèn)的血更多的是基于審證求因的病機抽象而不是單純靶點和物質(zhì)意義上的血——Blood,這是中醫(yī)學(xué)的核心思想和基本屬性使然。為此,本課題組先后進(jìn)行了國家自然科學(xué)基金《可控遞送中藥聯(lián)合生長因子生物膜促血管再生的實驗研究(30572332)》、江蘇省中醫(yī)藥局基金《生肌玉紅膏膠原配合創(chuàng)面負(fù)壓法促進(jìn)慢性缺血性巨大潰瘍愈合的研究(H05050)》與江蘇省“六大人才高峰”項目《可遞送中藥及生長因子原位誘導(dǎo)缺血心肌微血管再生的實驗研究(06-B-022)》的研究,獲得了黃芪單藥及其有效組分具有促血管新生作用的結(jié)論。該結(jié)論提示我們:黃芪補氣以生血的基礎(chǔ)表征之一是促進(jìn)血管的新生以增加物質(zhì)能量的產(chǎn)生、交換與耗散所表現(xiàn)出來的那種氣血旺盛的功能態(tài),其中涉及到多個系統(tǒng)、多個層面、多個靶點的支撐,簡介如下:
    1、實驗制得黃芪微乳膠原,HPLC法對其進(jìn)行了體外釋放度考察,初步認(rèn)定符合零級動力學(xué)模型,促血管新生有效物質(zhì)能恒速控制釋放,維持時間基本符合創(chuàng)傷修復(fù)的規(guī)律;考察了其體外降解率、穩(wěn)定性及細(xì)胞毒性狀況,符合實驗設(shè)計要求。
    2、離體實驗采用細(xì)胞培養(yǎng)模型,進(jìn)行了細(xì)胞增殖及遷移實驗,結(jié)果提示黃芪微乳載入修飾后的膠原具有促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移的功效,有助于血管的新生。
    3、在體實驗采用CAM模型與SD大鼠模型,測試指標(biāo)為微血管計數(shù)、膠原內(nèi)血紅蛋白含量及膠原的干重。研究發(fā)現(xiàn)黃芪微乳與血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)均具有顯著的促血管新生作用,效果相近。
    4、有關(guān)VEGF基因水平的研究采用RT-PCR法,結(jié)果顯示:黃芪微乳膠原在濃度為8.5、4.2μg/mL時對HUVEC細(xì)胞中的VEGF mRNA水平有顯著上調(diào)作用。
    在后續(xù)工作中,我們又相繼執(zhí)行了2項江蘇省自然科學(xué)基金:《黃芪-脈絡(luò)寧微乳復(fù)合物載入修飾后膠原促血管新生的實驗研究(BK200776)》與《黃芪提取物納米微乳膠原促血管生成的研究(BK200849)》,進(jìn)一步開展了黃芪微乳膠原促血管新生作用機理的研究,明確了VEGF mRNA的核因子κB蛋白的表達(dá)早于微血管新生與VEGF mRNA,這說明黃芪微乳膠原上調(diào)VEGF mRNA水平的作用可能是通過活化核因子κB信號通路而實現(xiàn)的。

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